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AviBiotinylation Kit (PE013)

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产品描述:

生物素连接酶由大肠杆菌BirA基因编码,通过重组大肠杆菌表达后多次纯化获得的高纯度酶制剂,分子量为35KD。生物素连接酶(Biotin Ligase,BirA EC 6.3.4.15)能够活化生物素,生成生物 素酰 -5´-腺苷酸,进而将生物素特异地转移到生物素受体蛋白(如 AviTag融合蛋白)上,使目标蛋白生物素化。

产品用途:

生物素受体蛋白的生物素化,特别是AviTag融合蛋白的生物素化,可以位点特异性的Biotin修饰目标蛋白,用于亲和纯化,基于biotin-avdin/streptavidin的检测如BIAcore传感片SA的亲和力检测等。由于修饰位点在标签上,对目标蛋白与靶分子结合的影响降到最低。

产品特点:
  • 特异性高:只修饰生物素受体蛋白,位点特异性生物素化,对目标蛋白影响最小
  • 操作简便:纯化或未纯化的蛋白加入相应试剂后30℃保温即可
产品常用缓冲体系:
总体积 25 μl,于30℃孵育 30~60 min使底物充分生物素化。
反应物组成体积
10×Biotin Ligase Buffer A2.5 μl
10×Biotin Ligase Buffer B2.5 μl
Biotin Ligase1.5 μl
蛋白(多肽)底物 (1nmol)18.5μl
产品各缓冲液组成:
Biotin Ligase储存缓冲液:50mM Imidazole, 50mM NaCl, 5% Glycerol, 5mM Mercaptoethanol, pH 6.8
10×Biotin Ligase Buffer A:0.5M Bicine,pH 8.3
10×Biotin Ligase Buffer B:100mM ATP, 100mM MgOAc, 500μM D-Biotin
D-Biotin:500μM D-Biotin
使用建议:

氯化钠(>100mM)、甘油(>5% W/V)、硫酸铵(>50mM)等许多常见的缓冲液成分会抑制生物素连接酶的活性。当底物蛋白(多肽)确有必要使用这些试剂时,应尽量降低浓度。本产品的生物素连接酶经严格质量控制,没有蛋白酶活性。如果用于生物素化的底物蛋白是未经纯化的粗提蛋白,建议加入适量的蛋白酶抑制剂,以防止在生物素化的过程中发生降解。

应用实例:
Avi生物素化试剂盒
图例一):目标蛋白生物素后回收率约70%
1.生物素化蛋白混合液
2.Avidin亲和纯化流出
3.Avidin亲和洗脱
M.蛋白中分子量Marker
产品包装:
Biotin Ligase (750 U/ μl)100μl
D-Biotin1ml
10×Biotin Ligase Buffer A1ml
10×Biotin Ligase Buffer B1ml
活性定义:
底物蛋白(多肽)浓度为38μM的条件下,于30℃孵育30min,将1pmol蛋白(多肽)生物素化所需的酶量定义为一个活性单位。
质量保证:
生物素连接酶通过离子交换、疏水层析等多步纯化,纯度大于95%,无蛋白酶与其它酶活性残余。
储存条件:

干冰运送,解冻后分装,避免反复冻融。长期保存置于-80℃,短期内使用置于-20℃,频繁使用可短时置于4℃。在4℃条件下保存三个月可保持>90%的酶活性。10×Biotin Ligase Buffer A、B和D-Biotin储存于-20℃,可反复冻融。

相关产品:
V104 pNovoAvi
V207 BirA/BL21(DE3)
For research use ONLY.