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FabCutter I Protease (PE015)

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产品描述:

FabCutter I为一种新型的高特异性高活性Fab切割酶,通过大肠杆菌表达,经多步纯化获得。该酶能对人、鼠、绵羊、山羊等物种不同亚型的免疫球蛋白IgGs进行快速单位点酶切。该酶的酶切位点位于免疫球蛋白IgG铰链区的上方,酶切产物为Fab片段和二聚体Fc片段。与木瓜蛋白酶,无花果蛋白酶,胃蛋白酶等相比,FabCutter I Protease具有酶切位点单一,切割快速等优点。

FabCutter酶切体系缓冲液的最适pH值为6.5-8.0(表一),最适反应温度为37℃,另外该酶发挥活性需要还原剂(表二)。

活性定义:

在10 mM Tris, 150 mM NaCl,2mM DTT,pH 7.4的反应体系内,37℃反应1小时,一个单位的酶能将1μg的人源IgG切割95%以上。

制剂与储存:
  • 酶活性50 U/μl,在10 mM Tris, 150 mM NaCl ,pH 7.4的溶液中经0.2μm无菌滤膜过滤后冻干。
  • -20℃保存,溶解后在4-8℃条件下可存放一个月。
  • 低温冰袋运输。
溶解:
  • 溶解前低速离心,使冻干粉末聚集于管底。
  • 用无菌ddH2O溶解,1000U酶加入20μl无菌ddH2O,5000U酶加入100μl无菌ddH2O,配制成酶活性为50U/μl的溶液。
  • 低速离心,使溶液汇聚于管底。
应用实例:
FabCutter I Protease
One unit cleaves ≥ 95% of 1μg human IgG1 when incubated in 10 mM Tris, 150 mM NaCl,2mM DTT, pH 7.4 at 37°C for 1 hour as monitored by SDS-PAGE.
1: Human IgG;2: Human IgG cleaved by FabCutter I;M: Protein Marker;
表一、可供选择的反应缓冲液及pH
Compatible Buffers pH
Phosphate Buffered Saline(PBS) 6.5-8.0
Tris Buffer7.0-8.0
Sodium Acetate Buffer6.5*
*pH在6.5以下要增加酶的用量
表二、可供选择的还原剂
Reducing Agent Concentration(mM)pH
DTT1-56.5-8.0
TCEP1-56.5-8.0
Cysteine50-1006.5-8.0
Cysteamine50-1006.5-8.0
Mercaptoethanol50-1006.5-8.0
操作方法:
  • 按照溶解说明将冻干粉溶解,配制成为50U/μL的溶液。
  • 待酶切的抗体溶解在反应缓冲液里,建议浓度为0.5-10mg/ml。
  • 按照1U酶切1μg IgG的量将酶加到反应缓冲液里,加入还原剂激活酶的切割反应,通常在中性pH条件下加入1-5Mm DTT或者TCEP。
  • 37℃酶切1个小时,取部分样品跑SDS-PAGE检测切割效果。

*可使用本kit中的Human IgG抗体做为底物测试酶切效果,用70μl ddH2O配制成1mg/ml的蛋白溶解,取50μl加入1μl的酶。酶切前后取样跑SDS-PAGE。

For research use ONLY.