FabCutter II Protease (PE016)

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产品描述:

FabCutter II Protease 是一种新型的Fab'切割酶,通过多步纯化获得。该酶能对人、鼠、绵羊等物种不同亚型的免疫球蛋白IgGs进行快速单位点酶切。增加酶的浓度和延长酶切时间,该酶也可以对小鼠的IgG2a 和 IgG3进行切割。该酶的酶切位点位于免疫球蛋白IgG铰链区的下方,酶切产物为2个F(ab')片段和Fc片段。与木瓜蛋白酶,无花果蛋白酶,胃蛋白酶等相比,FabCutter II Protease具有酶切位点单一,切割快速等优点。

FabCutter II Protease在生理条件下发挥酶切作用,保持抗体的免疫活性。该酶在pH6.0-8.0之间都具有活性(表一),最适酶切温度为37℃,常温下延长酶切时间也可达到同样的酶切效果。

活性定义:

在10mM PB,137mM NaCl, 2.7mM KCl, pH 7.4的反应体系内,37℃反应30min,一个单位的酶能将1μg的人源IgG切割95%以上。

制剂与储存:
  • 酶活性50 U/μl,在10mM PB,137mM NaCl, 2.7mM KCl,pH 7.4的溶液中经0.2μm无菌滤膜过滤后冻干。
  • -20℃保存,溶解后在4-8℃条件下可存放一个月。
  • 低温冰袋运输。
溶解:
  • 溶解前低速离心,使冻干粉末聚集于管底。
  • 用无菌ddH2O溶解,1000U酶加入20μl无菌ddH2O,5000U酶加入100μl无菌ddH2O,配制成酶活性为50U/μl的溶液。
  • 低速离心,使溶液汇聚于管底。
应用实例:
FabCutter II Protease
One unit cleaves ≥ 95% of 1μg human IgG1 when incubated in 10mM PB,137mM NaCl,2.7mM KCl,pH 7.4 at 37°C for 30 min as monitored by SDS-PAGE.
1: Human IgG;2: Human IgG cleaved by FabCutter II protease;M: Protein Marker;
表一、可供选择的反应缓冲液及pH
Compatible Buffers pH
Phosphate Buffered Saline(PBS) 6.0-8.0
MES Buffer5.5-6.5
HEPES Buffer7.0-8.0
Ammonium Bicarbonate Buffer 6.0-7.0
Sodium Acetate Buffer 6.0
*pH值低于5,会造成酶不可逆失活;pH值高于8.0,需要优化反应条件。
操作方法:
  • 按照溶解说明将冻干粉溶解,配制成为50U/μl的溶液。
  • 待酶切的抗体溶解在反应缓冲液里,建议浓度为0.5-10mg/ml。
  • 按照1U酶切1μg IgG的量将酶加到反应缓冲液里。
  • 37℃酶切30min,取部分样品跑SDS-PAGE检测切割效果。

*可使用本kit中的Human IgG抗体做为底物测试酶切效果,用70μl ddH2O配制成1mg/ml的蛋白溶解,取50μl加入1μl的酶。酶切前后取样跑SDS-PAGE。

For research use ONLY.