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NovoGlyc Endo S糖苷内切酶 (PE018)

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产品描述:

NovoGlyc糖苷内切酶(endoglycosidase)是一种高特异性糖苷内切酶,可以特异性水解去除抗体Fc片段上的N型糖链,酶活受到高甘露糖和半聚糖的抑制。酶切反应的最佳pH值为7.4,最佳反应温度为37℃。许多反应缓冲液的pH值处在6-8之间,建议客户针对不同的蛋白提前进行预实验,以确定最佳反应条件。NovoGlyc 糖苷内切酶带有His标签,易于从反应中去除。

NovoGlyc 糖苷内切酶反应缓冲液的最适pH值为6.0-8.0(表一)。

活性定义:

在10 mM sodium phosphate, 150 mM NaCl,pH 7.4反应体系内,37℃反应1小时,一个单位的酶能将1μg的人源IgG切割95%以上。

制剂与储存:
  • 酶活性20 U/μl,在10 mM sodium phosphate, 150 mM NaCl,pH 7.4的溶液中经0.2μm无菌滤膜过滤后冻干。
  • -20℃保存,溶解后在4-8℃条件下可存放一个月。
  • 低温冰袋运输。
溶解:
  • 溶解前低速离心,使冻干粉末聚集于管底。
  • 用无菌ddH2O溶解,1000U酶加入50μl无菌ddH2O,5000U酶加入250μl无菌ddH2O,配制成为酶活性为20U/μl的溶液。
  • 低速离心,使溶液汇聚于管底。
质量控制:
The activity of NovoGlyc endoglycosidases  on mAb.
The activity of NovoGlyc endoglycosidases on mAb.
mAb经NovoGlyc去糖基化(37度30分钟)并经FabCutter II加工为Fc和F(ab′)₂ 非还原电泳检测结果显示,Fc片段糖基化已经去除(泳道3,右下)。
1: mAb; 2: mAb+FabCutter II; 3: mAb+FabCutter II +NovoGlyc; M: Protein Marker
表一、可供选择的反应缓冲液及pH
Compatible Buffers pH
Phosphate Buffered Saline(PBS) 6.5-8.0
Tris Buffer7.0-8.0
Sodium Acetate Buffer 6.5*
*pH在6.0以下,需要增加酶的用量。
操作方法:
  • 按照溶解说明将冻干粉溶解,配制成为20U/μl的溶液。
  • 待酶切的抗体溶解在反应缓冲液里,建议浓度为0.5-10mg/ml。
  • 按照1U酶切1μg IgG的量将酶加到反应缓冲液里,通常在中性的条件下。
  • 37℃酶切1小时,取部分样品跑SDS-PAGE检测切割效果。

*可使用本kit中的Human IgG抗体做为底物测试酶切效果,用70μl ddH2O配制成1mg/ml的蛋白溶解,取50μl加入1μl的酶。酶切前后取样跑SDS-PAGE。

For research use ONLY.