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荧光素酶检测试剂盒 (PA004)

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产品描述:

荧光素酶报告基因检测试剂盒用于以虫荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶活性。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,发出生物荧光。然后通过荧光测定仪也称化学发光仪测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。通过荧光素和荧光素酶这一生物发光体系,可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。通常把目的基因转录的调控元件克隆在luciferase的上游或其他适当的地方,构建成报告基因质粒。转染细胞并适当刺激或处理后裂解细胞,测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断刺激前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。

产品特点:
  • 报告基因在翻译完成即有活性,不需要翻译后修饰,或荧光蛋白的成熟过程
  • 在所有化学荧光系统中具有最高的灵敏度,宿主细胞中无背景荧光
  • 检测时间快,一般单个样品检测只需要几秒钟
用途:

细胞生物学中用于基因表达研究或与基因表达偶联的其他细胞事件,如:报告基因活性检测、信号传导、mRNA加工、蛋白质折叠、蛋白质相互作用等。

保存条件:

报告基因细胞裂解液4℃保存3个月有效,-20℃保存一年有效;荧光素酶检测试剂-20℃避光保存6个月有效,-80℃避光保存一年有效。

注意事项:

1、样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同时间内,例如30秒内。

2、测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定,以减少温度对酶反应有影响。

3、建议适当分装后避光保存,避免反复冻融和长时间暴露于室温。三次以内的冻融对测定结果无明显影响。

4、样品和测定试剂混合后,必须等待1-2秒,再进行测定。测定时间通常为10秒,根据情况也可以测定更长或更短时间,但是同一批样品最好使用相同的测定时间。

应用实例:
荧光素酶检测试剂盒
图例一)不同剂量的IL-8对Luciferase报告基因表达的影响。
以Luciferase为报告基因时,EC50为0.91ng/ml。灵敏度比碱性磷 酸酶做报告基因高5倍(EC50=5.16ng/ml)。
Taq DNA Polymerase Amplification
图例二)以细胞数为基准,检测荧光素酶,标准曲线如右图。测得RLU如下:
细胞数05312.510625212504250085000170000
RLU15143417878200964560098210192675
产品包装:
试剂盒组成保存100次
报告基因细胞裂解液4℃60ml
荧光素酶检测试剂4℃10ml
For research use ONLY.

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