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His融合蛋白纯化柱是金属离子亲和层析柱的一种，是利用蛋白质表面的组氨酸与金属离子Ni2+的亲和作用对蛋白质进行分离的方法。 本His预装柱产品是预先用Ni2+偶联的90μm高度交联的琼脂糖凝胶填好的柱子，由于柱体和凝胶的巧妙设计，提供了一种高速，简单，方便的用于his标签重组蛋白的纯化工具。 · 用 途 His预装柱主要用于His tag融合表达蛋白的纯化。 · His预装柱使用方法 1. His预装柱将注射器或蠕动泵的管子注满结合缓冲液，将纯化柱与注射器（通过附带的接头）或蠕动泵的管子连接，要保证连接紧密，防止引入空气。整个纯化过程中，最高流速不能超过4ml/min（1ml柱）或20ml/min（5ml柱）。 2. 旋出末端堵头。 3. 用3-5倍体积的蒸馏水上柱，清洗纯化柱。 4. 用5倍体积结合缓冲液平衡纯化柱，建议流速为1ml/min（1ml柱）或5ml/min（5ml柱）。 5. 用注射器或蠕动泵将样品注入纯化柱中。 6. 用10-15倍体积的结合缓冲液进行漂洗，直到吸光值达到稳定值。 7. 用洗脱缓冲液进行洗脱。洗脱方法有一步洗脱和梯度洗脱两种。 一步洗脱：用5倍体积的洗脱缓冲液进行洗脱。洗脱液的流速建议为1ml/min（1ml柱）或5ml/min（5ml 柱）。 梯度洗脱：用20倍甚至更高体积的溶液进行梯度洗脱，梯度洗脱可用于分离两种对纯化柱有不同亲和力的蛋 白。 6. 用5-10倍柱体积的洗脱缓冲液进行洗脱。 ·保存条件 在20%的乙醇中，4℃长期储存。 · 其他说明 详细内容请参考说明书 |
