DNA凝胶回收试剂盒 (DK005)

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产品描述:                       
           本试剂盒采用温和的溶胶液,可以使琼脂糖凝胶完全融化,同时避免在高温下DNA发生脱嘌呤和末端水解,保持DNA完整的生物学活性。采用硅胶膜选择性吸附DNA的方法回收DNA,适合从TAE或者TBE琼脂糖凝胶中纯化回收多至4μg,长度介于50bp-10kb的DNA片段,回收率为90%.。纯化回收的DNA可直接酶切、连接、转化细菌、测序、PCR、杂交等后续操作。
 
产品内容:
   

产品组成 DK005-01A
(50T)
DK005-01B
(100T)
DK005-01B
(250T)
Binding Buffer 40ml 80ml 200ml
Wash   Buffer 15ml 30ml 72ml
Elution  Buffer 10ml 15ml 20ml
DNA纯化柱 50个 100个 250个
 
 
 
 
 
 
 
 
 
保存条件:
             该试剂盒在室温条件下,可保存12个月,更长时间保存可置于4℃。
 
注意事项:
1. Wash  Buffer在使用前按照试剂瓶所示体积加入无水乙醇,混合均匀。
2. Buffer GL在较低温度下易沉淀,若出现沉淀,使用前请在37℃加热几分钟,至沉淀溶解后再使用。 
3.建议使用TAE电泳分离DNA,因为TBE中的硼酸与琼脂糖生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而降低DNA回收率。
4. 尽量减少紫外照射的时间,以免损伤DNA。
5. 水浴期间要间断性摇晃离心管,加速溶胶进行下一个步骤,减少DNA回收率的降低。
 
操作步骤:
  1. 将切割的凝胶转入预先称重的1.5ml离心管中,加入等体积的Buffer GL(100mg的凝胶加入100μl Buffer I)。放入55-60℃水浴中,间断摇晃混合,直至凝胶完全融化(约5-10min),放置使其冷却至室温。
  2. 将上述混合液加入DNA回收柱内,如果溶液体积>700μl,分次转移溶液;室温放置1-2min或更长时间。
  3. 13,,000g离心1分钟,弃废液。目的DNA长度≤500bp时,离心结束后将收集管中的溶液再次转入DNA纯化柱中,离心。
  4. 在DNA纯化柱中加入650μl Wash  Buffer,13,000g离心30秒,弃废液,将DNA纯化柱放回收集管。
  5. 重复步骤4。
  6. 13,000g离心3 min,以去除柱中残余乙醇。
  7. 将纯化柱放入新的离心管中,向柱中加入在60℃下预热的30-50μl Elution Buffer或ddH2O,室温放置1-2min或更长时间。

            建议:加入Elution  Buffer后将柱子整个温育5min后再离心洗脱可以增加DNA回收效率。
            对大于8Kb的片段,加溶液Elution  Buffer后将柱子整个温育15-30min可以提高回收效率。 

 

  1. 13,000g离心1 min,所得液体即为高纯度DNA。
参考文献

  • Xu G, Zheng K, Lu X, et al.
    Association between polymorphisms in the promoter region of T cell immunoglobulin and mucin domain-3 and myasthenia gravis-associated thymoma.
    Oncology letters, 2015, 9(3): 1470-1474(2015)
For research use ONLY.