T4噬菌体beta葡糖基转移酶 (M009)

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产品描述:

T4噬菌体β -葡糖基转移酶能特异性地将尿嘧啶二磷酸葡萄糖(UDP-Glc)的葡萄糖单元转移至双链DNA的5-羟甲基胞嘧啶残基上,形成β-葡糖基-5-羟甲基胞嘧啶。T4噬菌体beta葡萄糖转移酶通过克隆了T4噬菌体bgt基因的重组大肠杆菌获得。

T4噬菌体β-葡糖基转移酶对5-hmC残基的定向修饰来区分5-mC和5-hmC。这种酶可以将所有5-hmC糖基化,产生5-ghmC。这个反应是序 列无关的,因此所有5-hmC都将糖基化,而C或5-mC则不受影响。

产品用途:
  • 糖基化DNA中5-羟甲基胞嘧啶。
  • 免疫检测DNA中5-羟甲基胞嘧啶。
  • 通过与[3H]或[14C]-UDP-葡萄糖一起孵育将[3H]或[14C]-葡萄糖掺入到含有5-羟甲基胞嘧啶的DNA受体中,对5-羟甲基胞嘧啶残基标记。
  • 通过核酸内切酶保护分析检测DNA中的5-羟甲基胞嘧啶
基因组DNA中5-羟甲基胞嘧啶分析:
方案一、
第1步:糖基化

基因组DNA用T4-BGT处理,让所有5-hmC糖基化,产生5-ghmC。这个反应是序列无关的,因此所有5-hmC都 将糖基化,未修饰或5-mC DNA则不受影响。

第2步:限制性内切酶消化

MspI和HpaII识别相同的序列(CCGG),但是对不同的甲基化状态敏感。HpaII只切割完全未修饰的位 点,胞嘧啶上的任何修饰(5-mC、5-hmC或5-ghmC)都阻碍切割。MspI则识别并切割5-mC和5-hmC,5-ghmC除外。

第3步:PCR分析

用引物扩增实验的靶DNA和对照的靶DNA。如果CpG位点含有5-羟甲基胞嘧啶,那么糖基化和消化之后检测 到条带,但是未糖基化的对照反应中没有。如果使用实时定量PCR,那么就可以估计这个位点大概有多少 羟甲基胞嘧啶。

方案二、TAB-Seq*

*Miao Yu,1,5 Gary C. Hon,2,5 Keith E. Szulwach etc. Cell 149,1368–1380, June 8, 2012

产品包装:
组成 体积
T4 beta 葡萄糖基转移酶(350U/ul) 80ul
10×T4 BGT Reaction Buffer 1 ml
质量保证:
经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带;PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。
活性定义:
1 单位指能够保护 0.5 μg T4 bgt-DNA 免受 MfeI 限制性内切酶切割所需要的酶量。
10×反应缓冲液:
50 mM Potassium Acetate,20 mM Tris- acetate,10 mM Magnesium Acetate,1 mM DTT, pH 7.9 at 25℃
贮存缓冲液:
20 mM KPO4,200 mM NaCl,0.25 mM DTT,0.1 mM EDTA,50% Glycerol,pH 7.0 at 25℃
热失活:
65℃ 20 分钟
For research use ONLY.