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单细胞全基因组扩增试剂盒 (E128)

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产品描述:

单细胞全基因组扩增试剂盒基于多重链置换扩增的Phi29 DNA聚合酶等温扩增体系,Phi29 DNA聚合酶是从Bacillus subtilis噬菌体Phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶,利用基因重组技术,在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。Phi29 DNA聚合酶具有很强的链置换活性,可实现对DNA复杂结构的解链与复制。同时具有高效的DNA合成能力,可连续合成多达70kb的DNA片段。Phi29 DNA聚合酶具有很强的3’→5’外切酶活性,保真度高于绝大多数高保真酶,因此Phi29 DNA聚合酶特别适合用于全基因组扩增。

本试剂盒可以实现单个细胞或者少量样本的全基因组无差别扩增,一个反应可以达到40ug的全基因组DNA。低质量样品会影响DNA的最终产量,如果以DNA样品为模板,需避免使用降解的DNA作为起始模板。

产品特点:
  • 高覆盖度:经过扩增后可达到95%以上覆盖度。
  • 高均一度:无偏好扩增,可实现全基因组的均一扩增。
  • 高保真:具有很强的校正功能,保真度高。
  • 灵敏:可实现从单个细胞样本的全基因组扩增
实验方案:
方案适用于以1-1000个新鲜配制的细胞样品作为模板,以保证起始基因组的完整性。
1.将细胞用PBS洗涤三次。
2.取一倍体积的细胞,加入一倍体积的Cell Lysis Buffer,轻轻混匀(勿涡旋混匀)后置于冰上放置10min。
3.加入一倍体积的Neutralization Buffer,轻轻混匀,勿涡旋混匀。
4.从上述混合液中取3μL样品,加入7μL无菌水,10μL Reaction Buffer。
如果不进行后续反应,需冰上放置。将20uL上述处理后的样品加入到25uL GenoPhi29 Buffer中。
5.加入5μL GenoPhi29 Enzyme,30℃反应3h。
65℃,10min失活Phi29 DNA聚合酶。
6.扩增产物是高浓度基因组DNA,需要将扩增产物用无菌水或者TE缓冲液进行稀释后进行下游实验。
产品包装:
组成体积
Cell Lysis Buffer1ml
Neutralization Buffer1ml
Reaction Buffer1ml
GenoPhi29 Buffer1ml
GenoPhi29 Enzyme(10U/ul)50ul
ddH2O1ml
质量保证:
出厂前经模拟扩增验证;无核酸内、外切酶污染。
For research use ONLY.