Hot Start Taq DNA聚合酶 (E017)

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产品描述:

本制品是Taq酶经特殊工艺处理后的制品,经处理后的Taq酶在加热至高温前,其聚合酶活性被抑制,从而抑制低温条件下由引物的非 特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增(图例二)。本制品适 用于高特异性PCR反应、Multiplex PCR、高GC含量(>60%),有二 级结构等有较强背景的基因组扩增和大规模基因组扩增检测。

产品特点:
  • 简便:与目前通用的最有效的热启动酶反应条件一致,不需要改变PCR程序。
  • 高效:有效减少了杂带及拖带产生,从而实现高特异性的PCR。
  • 灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段。(图例一)
产品用途:
  • 高特异性PCR反应;
  • 复杂模板扩增;
  • Multiplex PCR;
  • 基因组扩增检测;
  • 荧光定量PCR;
使用建议:
  • 使用本试剂扩增得到的PCR产物3´ 端有一突出"A"碱基,可直接克 隆于T-vector中。
  • 当扩增较长片段时,推荐使用HotStart Taq plus,该酶对于较长的DNA片段扩增具有更高的扩增效率及保真度。
应用实例:
Taq DNA Polymerase Amplification
图例一) 50μl扩增体系中,以50ng人基因组DNA为模板,HotStart Taq可对特定基因(170bp)进行高特异性扩增。
泳道M:DNA Ladder 2000; 泳道1、2:Taq酶 1.25U; 泳道3、4: Hot Start Taq酶 1.25U
Taq DNA Polymerase Amplification
图例二)热启动效果检测。左 1-6:94度10分钟热激活后,目的基因扩增;
右1-6:无热激活步骤直接 PCR。PCR扩增条件:94度5秒->57 度20秒->72度20秒,25个循环。结 论:未做热激活时,Taq酶活性被完 全抑制。(1-6酶用量分别为5U,2.5U,1.25U,0.625U,0.312U,0.156U)

质量保证:

经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一 的目的条带;PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。

活性定义:

热激活后,在74℃条件下,30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。

常用反应体系(50μl)

5×HS Taq Buffer10μl
上游引物0.2-1.0μM(终浓度)
下游引物0.2-1.0μM(终浓度)
dNTP(各10mM)1.0μl
模板1-50ng(质粒)
10ng-1μg(基因组)
Hot Start Taq0.25μl(1.25U)
ddH2O至50μl
*Mg2+终浓度为2mM

常用PCR循环:

当扩增片段<3K:
94℃ 10分钟
30次循环94℃,20秒/57℃
20秒/72℃
根据产物长度调整, 60秒/kb
72℃5分钟
4℃保温
当扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp):
94℃10分钟
30次循环 94℃,5秒/68℃
根据产物长度调整, 60秒/kb
72℃5分钟
4℃保温
For research use ONLY.