Hot Start Taq Plus DNA 聚合酶 (E018)

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产品描述:
本制品是Taq Plus经特殊工艺处理后的制品。经处理后的Taq Plus酶在热激活前,其聚合酶活性被抑制,从而抑制低温条件下由引 物的非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增。本制品适用 于高特异性PCR反应、Multiplex PCR、高GC含量(>60%),有二级结构等有较强背景的基因组扩增的扩增和大规模基因组扩增检测。与 HotStart Taq DNA聚合酶相比,具有扩增长度增加(简单模板可有效 扩增20kb,复杂模板可有效扩增10kb), 保真度好的特点。
产品特点:
  • 简便:与常规热启动酶反应条件一致,无需改变PCR程序设置(图 例一)。
  • 高效:有效减少了杂带及拖带产生,从而实现高特异性的PCR。
  • 灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段。
产品用途:
  • 高特异性PCR反应;
  • 复杂模板扩增;
  • Multiplex PCR;
  • 基因组扩增检测;
  • 大片段PCR扩增反应 (可达 20 kb)。
使用建议:
使用本试剂扩增得到的PCR产物3´端有一突出"A"碱基,可直接克隆于T载体中。
应用实例:
Taq DNA Polymerase Amplification
图例一) 50μl扩增体系中, 以50ng人基因组DNA为模板,HotStart Taq plus可对特定基因 片段(170bp)进行高特异性扩增。
泳道M:DNA 2000 Ladder; 泳道1:Taq酶 1.25U;泳道2: Hot Start Taq酶,1.25U

产品包装:

组成体积
HotStart Taq Plus(5U/μl)50μl
dNTP混合液(各10mM)*200μl
5×HotStart Taq Plus Buffer with Mg2+2ml
*E018-02系列不含dNTP混合液

质量保证:

经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一 的目的条带;PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留, 无核酸内、外切酶污染。

活性定义:

在74℃条件下,30分钟内催化10nmol dNTP的掺入 反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。

常用反应体系(50μl)

5×HS Taq Buffer10μl
上游引物0.2-1.0μM(终浓度)
下游引物0.2-1.0μM(终浓度)
dNTP(各10mM)1.0μl
模板1-50ng(质粒)
10ng-1μg(基因组)
Hot Start Taq0.25μl(1.25U)
ddH2O至50μl
*Mg2+终浓度为2mM

常用PCR循环:

当扩增片段<3K:
94℃ 10分钟
30次循环94℃,20秒
57℃ 20秒
72℃ 根据产物长度调整, 60秒/kb
72℃5分钟
4℃保温
当扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp):
94℃10分钟
30次循环 94℃,5秒
68℃ 根据产物长度调整, 60秒/kb
72℃5分钟
4℃保温
For research use ONLY.