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Super Phi29 DNA 聚合酶 (E012)

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产品描述:

Novoprotein Super Phi29 DNA 聚合酶是通过蛋白质工程改造的phi29 DNA 聚合酶在大肠杆菌中进行表达后,经多次纯化分离获得。与天然phi29 DNA 聚合酶相比,具有更高的扩增效率和灵敏度。Phi29DNA聚合酶具有高效的DNA合成能力,可连续合成多达70kb的DNA片段。同时该酶具有3´→5´外切酶校读功能,保真性高,还具有特殊的链置换和连续合成特性。

产品特点:
  • 极高的掺入率。
  • 超强的链置换能力。
  • 保真性高。
  • 中温下反应。
产品用途:
  • 恒温protein-primed DNA扩增。
  • 利用随机引物扩增DNA。
  • 滚环复制。
  • 复制extended-region。
应用实例:
Taq DNA Polymerase Amplification
图例一)Super phi29 DNA Pol扩增
以菌液为模板,扩增pUC19质粒,自左向右模板量分别为10μl反应体系中加入0.5μl,1μl,2μl,3μl菌液做模板。左图:扩增产物直接电泳,由于产物量较大,部分DNA未电泳出加样孔(上样量2μl);右图:扩增产物EcoRI酶切后电泳,显示与pUC19大小一致的均一条带。
Taq DNA Polymerase Amplification
图例二)Super phi29 DNA Pol与野生型phi29 DNA Pol 比较
1,2,3与4,5,6分别为扩增1小时,2小时,3小时的结果。10μl反应体系中加入1ng人基因组DNA,上样量2μl。1-3:野生型酶;4-6:Super phi29 DNA Polymerase。
产品包装:
组成体积
Super phi29 DNA 聚合酶125U
dNTP混合液(各10mM)*200μl
10×phi29 Buffer1ml
*E012-02系列不含dNTP混合液
质量保证:
经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带;PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。
活性定义:
在30℃条件下,10min内能使0.5 pmol的dNTP掺入酸不溶性物所需要的酶量定义为1个活性单位。
常用反应体系(50μl)
10×phi29 Buffer5μl
随机引物(1mM) 1.25μl
质粒模板(1μg/ml)1μl
加ddH2O至45μl,95℃预变性3min,冰上冷却。
dNTP(各10mM)2.5μl
100x BSA0.5μl
phi29 DNA Pol2.5μl
30℃过夜
10×反应缓冲液:
500mM Tris-HCl(pH 7.5), 100mM MgCl2,100mM (NH4)2SO4,40mM DTT。反应时需要加入dNTP。
保存体系
10mM Tris-HCl pH7.5,100mM KCl,1mM DTT,0.1mM EDTA,0.5% NP40, 0.5% Tween 20,50% glycerol;-20℃贮存。
For research use ONLY.