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Taq DNA聚合酶 (E001)

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产品描述:
本制品是94kDa的耐热性DNA聚合酶,是把Thermus aquaticus DNA Polymerase基因在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得到 的。它与天然Taq DNA聚合酶具有相同的功能。使用本制品扩增得到的 PCR产物的3´端附有一个"A"碱基,因此可直接克隆于T载体中。配以Novoprotein独特配方的5×反应缓冲液(已添加Mg2+)可获得更加理 想的扩增结果。
产品特点:
  • 高效:以λDNA为模板,扩增长度可达8kb,可以高效扩增≤4kb片 段。
  • 灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段。
  • 高品质:完全满足Real Time PCR的实验要求。
  • 独特配方的5×Buffer:使PCR扩增反应更加稳定、灵敏、高效。
产品用途:
  • 常规PCR鉴定;
  • 小片段目标基因克隆;
  • 平端PCR产物加A;
  • 双脱氧法测序;
  • 荧光定量PCR;
使用建议:
  • 使用本试剂扩增得到的PCR产物3´ 端有一突出"A"碱基,可直接克隆 于T载体中。
  • 如需扩增克隆较长片段建议换用Pfu DNA聚合酶。当扩增大片段 时,Taq酶的扩增效率大大低于Taq Plus酶,在>4Kb片段的PCR扩增中建议换用Taq Plus酶。
应用实例:
Taq DNA Polymerase Amplification
图例一) 50μl扩增体系中,以5ngλDNA 为模板,对500bp~6.0kb的扩增结果。
泳道M:1KB DNA Marker;泳道1:0.5kb;泳道2:1.0kb;泳道3:2.0kb;泳道4:3.0kb;泳道5:4.0kb;泳道6:6.0kb;
Taq DNA Polymerase Amplification
图例二) 50μl扩增体系中,分别以50ng~0.05ng人基因组DNA为模板,可对特定基因片段(380bp)进行很好的扩增。
泳道1:50ng;泳道2:5ng;泳道3:0.5ng;泳道4:0.05ng;泳道M:DNA Ladder 2000

产品包装:

Taq DNA 聚合酶 (5U/μl)50μl
dNTP混合液(各10mM)*200μl
5×Taq Buffer with Mg2ml
*E001-02系列不含dNTP混合液

质量保证:

经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带;PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。

活性定义:

在74℃条件下,30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。

常用反应体系(50μl)
5×Taq Buffer10μl
上游引物0.2-1.0μM(终浓度)
下游引物0.2-1.0μM(终浓度)
dNTP(各10mM)1.0μl
模板1-50ng(质粒)
10ng-1μg(基因组)
Taq0.25μl(1.25U)
ddH2O至50μl

常用PCR循环:

当扩增片段<3K:
94 C 1分钟30秒
30次循环94℃,20秒/57℃
20秒/72℃
根据产物长度调整, 60秒/kb
72℃5分钟
4℃保温
当扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp):
94 C20秒
30次循环 94℃,5秒/68℃
根据产物长度调整, 60秒/kb
72℃5分钟
4℃保温
For research use ONLY.