Taq Plus DNA聚合酶 (E009)

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产品描述:

Taq Plus DNA聚合酶是Taq DNA聚合酶和Pfu DNA聚合酶按特定比例混合而成。Taq Plus DNA聚合酶具有Taq DNA聚合酶很强的DNA聚合能力,同时由于Pfu DNA的存在,具有一定的保真特性, 能部分纠正 DNA扩增过程中所出现的错误。与Taq DNA聚合酶相比,具有扩增长度 增加(简单模板可有效扩增20kb,复杂模板可有效扩增10kb), 保真度好的特点;与Pfu DNA聚合酶相比,具有扩增能力强,反应效率高的优 势。使用本制品扩增得到的PCR产物具有3´端"A"突出,因此可直接克隆于T载体中。

产品用途:
  • 可替代大部分Taq DNA聚合酶的用途;
  • 需高灵敏度的PCR扩增;
  • 大片段PCR扩增反应 (可达 20kb)。
使用建议:
使用本制品扩增得到的PCR产物具有3´端"A"突出,可直接克隆于T载体中。
应用实例:
Taq DNA Polymerase Amplification
图例一)使用Taq Plus配制的50μl扩增体系中,以5ng λDNA为模板,对1kb~20kb片段的扩增结果。
泳道M:λ/HindIII;泳道1:1kb; 泳道2:2kb; 泳道3:4kb; 泳道4:6kb; 泳道5:8kb; 泳道6:10kb 泳道7:12kb 泳道8:20kb
Taq DNA Polymerase Amplification
图例二)50μl扩增体系中,分别以100ng~0.1ng小鼠基因组DNA为模板,可很好地扩增出1.1kb DNA片段(IL-1b 基因)。
泳道M:DNA Ladder 2000 泳道1:100ng; 泳道2:10ng; 泳道3:1ng; 泳道4:0.1ng

产品包装:

组成 体积
Taq Plus DNA(5U/μl) 50μl
dNTP混合液(各10mM)* 200μl
5×Taq Plus Buffer with Mg2+ 1ml
*E009-02系列不含dNTP混合液

质量保证:

经多次柱纯化,SDS-PAGE检测纯度大于95%;PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留、无核酸内、外切酶污染。

活性定义:

在74℃条件下,30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。

常用反应体系(50μl)

组分 体积
5× Taq Plus Buffer 5μl
上游引物 0.2-1.0μM(终浓度)
下游引物 0.2-1.0μM(终浓度)
dNTP(各10mM) 1.0μl
模板 1-50ng(质粒)
10ng-1μg(基因组)
Taq Plus 0.25μl(1.25U)
ddH2O 至50μl
*Mg2+终浓度为2mM

常用PCR循环:

当扩增片段<3K:
94 C 1分钟30秒
30次循环 94℃,20秒/57℃
  20秒/72℃
  根据产物长度调整, 60秒/kb
72℃ 5分钟
4℃ 保温
当扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp):
94 C 20秒
30次循环 94℃,5秒/68℃
  根据产物长度调整, 60秒/kb
72℃ 5分钟
4℃ 保温
For research use ONLY.