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Phi29 DNA聚合酶 (E013)

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产品描述:

本酶是从Bacillus subtilis噬菌体Phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶,利用基因重组技术,在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。Phi29 DNA聚合酶具有高效的DNA合成能力,可连续合成多达70kb的DNA片段。同时该酶具有3´→5´外切酶校读功能,保真性高,还具有特殊的链置换和连续合成特性。

产品特点:
  • 极高的掺入率。
  • 超强的链置换能力。
  • 保真性高。
  • 中温下反应。
产品用途:
  • 恒温protein-primed DNA扩增。
  • 利用随机引物扩增DNA。
  • 滚环复制。
  • 复制extended-region。
注意事项:
  • 该酶缓冲液中含有还原剂DTT以便保证其最大酶活性。故如果缓冲液不新鲜或经过反复冻融,使用前应添加4mM的DTT。
  • 要求高扩增效率的反应,请选择Novoprotein蛋白质工程改造的升级版super phi29 DNA 聚合酶(E012)。
应用实例:

应用:菌液测序模板制备

优点:无需细菌培养、收集、裂解和质粒DNA的分离与纯化,不需要离心机和PCR仪。

步骤:

  • 样品预变性:挑取单克隆,参考右侧反应体系热变性。
  • 质粒扩增:按右侧反应条件进行,如选用Novoprotein super phi29 DNA 聚合酶(E012)反应时间可缩短到1小时*
  • 热失活:65℃10分钟。
  • 测序反应:取上述反应液2μl加8μl双蒸水,即可用于直接测序。
* Super Phi29 DNA Pol与本产品效果比较见E012说明。
产品包装:
组成 体积
phi29 DNA 聚合酶 125U
dNTP混合液(各10mM)* 200μl
10×phi29 Buffer 1ml
*E013-02系列不含dNTP混合液
质量保证:
经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带;PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。
活性定义:
在30℃条件下,10min内能使0.5 pmol的dNTP掺入酸不溶性物所需要的酶量定义为1个活性单位。
常用反应体系(50μl)
10×phi29 Buffer 5μl
随机引物(1mM) 1.25μl
质粒模板(1μg/ml) 1μl
加ddH2O至45μl,95℃预变性3min,冰上冷却。
dNTP(各10mM) 2.5μl
100x BSA 0.5μl
phi29 DNA Pol 2.5μl
30℃ 过夜
10×反应缓冲液:
500mM Tris-HCl(pH 7.5), 100mM MgCl2,100mM (NH4)2SO4,40mM DTT。反应时需要加入dNTP。
保存体系
10mM Tris-HCl pH7.5,100mM KCl,1mM DTT,0.1mM EDTA,0.5% NP40, 0.5% Tween 20,50% glycerol;-20℃贮存。
For research use ONLY.