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NovoScript® One-Step RT-PCR SuperMix (E045)

目录 规格 价格
E045-01A 200次 1600
产品描述:

NovoScript® One-Step RT-PCR Kit一步法RT-PCR试剂盒是基于本公司NovoScript® Reverse Transcriptase反转录酶(Cato: E123)和HotStart Taq DNA聚合酶(Cato: E017),对缓冲液体系进行优化使反转录酶和聚合酶同时发挥最大功效,具有方便、快速、灵敏度高、重复性好等特点。该试剂盒能以动物、植物和微生物的总RNA或mRNA为模板,cDNA合成和PCR反应在一个管中进行,反转录结束后可直接进行PCR循环而不用增加额外的步骤;同时可对低至1fg的总RNA进行扩增,有助于大量样品的处理并减少污染机会。

产品特点:
  • 效率高,可反转录GC含量高,二级结构复杂的RNA模板。
  • 独特的缓冲体系使反转录酶和聚合酶同时发挥最大功效。
  • 操作简单,可最大限度的避免污染。
注意事项:
  • 本试剂盒PCR扩增延伸时间为1kb/min,客户可根据具体片段长度进行延伸时间的调整。
  • 通常情况,28~30个循环可达到最佳扩增,对于低拷贝目的基因的检测,可将循环数增加到40个。
  • 如果同时操作多个样品,建议先在冰上先配制预混液,然后再分装到各个反应管中,加入模板启动反应。
  • 反应出现目标条带拖带,系模板浓度过高或特异引物浓度不适等原因所致,可对模板及引物浓度等进行调整;反应出现杂带,可对退火温度进行调整,或重新设计特异性高的引物。
  • 本试剂盒只需使用特异性反转录引物,无需使用Random Primer和OligodT Primer等进行反转录反应。
  • 为了保证反应的正常进行,需使用高质量的RNA模板。
应用实例:
一步法 RT-PCR
图例一)小鼠胚肝总RNA使用novoprotein一步法RT-PCR扩增。
泳道1-9总RNA量分别为1ng-0.01pg,10倍梯度稀释,目的基因:GAPDH,扩增灵敏度可达到0.1pg。

产品包装:

产品组成 体积
NovoScript® RT Enzyme Mix 200μl
2×NovoScript® One-Step RT-PCR SuperMix 1ml×2
RNase Free Water 1ml×2
操作方法:

1) 将RNA模板、引物、2×NovoScript® One-Step RT-PCR SuperMix,NovoScript® RT Enzyme Mix和RNase Free Water 溶解并置于冰上备用。

2) 配制以下反应体系:

组分 体积
模板RNA 0.1ng-5ug
NovoScript® RT Enzyme Mix 1μl
2×NovoScript® One-Step RT-PCR SuperMix 10μl
上游引物 10μM 0.5-1μl
下游引物 10μM 0.5-1μl
ddH2O 至20μl

3) 轻轻混匀后短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底。

4) 设置反应程序:

42℃ 5min/500bp
95℃ 5min
25-30次循环 95℃,20秒
  57℃ 20秒
  72℃ 根据产物长度调整,60秒/kb
72℃ 5分钟
4℃ 保温
For research use ONLY.