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NovoStart®SYBR qPCR SuperMix (E090)

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产品描述:

本制品是采用SYBR Green嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂。制品中已经将DNA聚合酶、反应用Buffer、dNTP、SYBR Green 等试剂预混在一起,是一种2×浓度的预混型试剂,进行实验时,PCR反应液的配制十分方便简单。

本制品采用Hot Start Taq并结合特别配方的反应缓冲液,能有效抑制非特异性反应,提高了反应特异性,能够在更广的范围内进行准确定量。

产品特点:
  • 高特异性:采用特殊工艺制造的HotStart Taq DNA聚合酶,可以进行热启动法PCR反应,大大提高了PCR扩增的特异性。
  • 高效:Novoprotein精心配制的RealTime PCR专用2×Master Mix,具有更高扩增效率和扩增灵敏度。
  • 快捷:PCR反应所必需试剂全集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配制。
使用建议:

1)保存:原则上-20oC遮光保存。如果持续使用,可在4℃内进行短期保存,但此时须遮光,建议使用遮光箱或用添附的铝袋进行保存。

2)使用:请上下颠倒轻轻均匀混合,避免起泡,并经轻微离心后使用。 反应液的配制、分装请使用新的(无污染的)枪头、Microtube等,尽 量避免污染。建议反应液体积为25 ~ 50 μl。

3)引物设计:一般为了增加敏感度及扩增效率且抑制非特异性反应,扩 增目标序列越短越好。建议设计成200bp以下。另外对GC cluster(特 别是3´末端)等,会引起引物二聚体等非特异反应,一般不建议采用, 特别是Intercalater Assay受非特异性反应影响较大,更需注意。

4)First Strand cDNA的使用:由于逆转录酶经热处理后仍会对PCR有抑 制性影响,故建议将1st Strand cDNA合成反应液用蒸馏水稀释后再加以使用。

适用的Real Time PCR扩增仪:
ABI PRISM7000/7700/7900HT,7300/7500 Real-Time PCR System,7500 Fast
Real-Time PCR System(Applied Biosystems)
LightCycler(Roche Diagnostics)
Line-Gene(Bioer,杭州博日)
Smart Cycler® System(Cepheid)
Mx3000P(Stratagene)
其他各种Real Time PCR扩增仪。
产品包装(A包装):
2×SYBR Green Realtime Master Mix 1ml×1支
常用反应体系(50μl):
2×Master Mix* 10ul
上游引物 0.2-1.0uM(终浓度)
下游引物 0.2-1.0uM(终浓度)
模板 1-2ul
ddH2O 至20ul
  *Mg2+终浓度为2mM
常用PCR循环:
两步法PCR扩增程序(推荐):
94℃, 10分钟
95℃, 10秒
40次循环: 95℃,5秒
60℃,20秒
三步法PCR扩增程序(引物TM值较低或其他原因):
94℃, 10分钟
95℃, 10秒
40次循环: 95℃,5秒
57℃,20秒
72℃,20秒
For research use ONLY.