2×Fast Pfu Master Mix (E035)

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产品描述:
本制品是将PCR反应所需的Fast Pfu酶、dNTP、MgCl2、反应缓冲液以及优化剂以及稳定剂,预先配制成2倍浓度的混合物。2×Fast Pfu Master Mix专为扩增克隆DNA片段优化,高保真,错误率仅为1.3x10-6。使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应,非常方便。较普通Pfu酶,2×Fast Pfu Master Mix具有快速、高灵敏度、抗干扰能力强等特点,能获得更理想的扩增结果,并大幅度缩短扩增反应时间。
产品特点:
  • 高保真:具有同Pfu酶相同的保真度,为普通Taq酶的10倍。
  • 快速:Fast Pfu扩增速度为普通Pfu酶的数倍,72oC保温30秒可延伸1kb以上。
  • 灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段
  • 快捷:PCR反应所必需试剂全集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配制。
  • 便利:10μl,25μl或50μl体系全部适用。
产品用途:
用于要求保真度比较高的PCR反应,包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成等。
使用建议:
Fast Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端,无3´端"A"突出,其PCR产物的克隆有两种方案:
  • PCR前引物进行5´端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中。
  • 将产物3´末端加A后再与T载体连接。

由于Fast Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3´端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度,理想的引物长度为20-30bp 碱基。另外为了减少由3´- 5´外切酶活性引起的引物降解,尽量在冰上配制反应体系。

应用实例:
Taq DNA Polymerase Amplification
图例一) 50μl扩增体系中,分别以50ng~0.05ng人基因组DNA为模板,可对特定基因片段(1.2kb)进行很好的扩增。
泳道M:DNA 2000 Ladder;泳道1:50ng; 泳道2:5ng; 泳道3:0.5ng;泳道4:0.05ng;

产品包装(A包装):

组成体积
2×Fast Pfu Master Mix0.5ml×1支

常用反应体系(50μl):

组分体积
2×Master Mix*25μl
上游引物0.2-1.0μM(终浓度)
下游引物0.2-1.0μM(终浓度)
dNTP(各10mM)1.0μl
模板1-50ng(质粒)
10ng-1μg(基因组)
ddH2O至50μl
*Mg2+终浓度为2mM

常用PCR循环:

当扩增片段<3K:
94℃1分钟30秒
30次循环94℃,30秒
57℃ 30秒
72℃ 根据产物长度调整, 30秒/kb
72℃5分钟
4℃保温
当扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp):
94℃1分钟30秒
30次循环 94℃,5秒
68℃ 根据产物长度调整, 30秒/kb
72℃5分钟
4℃保温
For research use ONLY.