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2×Hot Start Taq Master Mix (E027)

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产品描述:
本制品是将PCR反应所需的HotStart Taq酶、dNTP混合物、MgCl2 以及反应缓冲液预先配制成2倍浓度的混合物。使用时只需加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应,大大地简化了操作过程,减少了PCR操作过程中的污染。本制品所使用的HotStart Taq是经特殊工艺处理后的Taq酶,在加热至高温前,其聚合酶活性被抑制,从而抑制低温条件下由引物的非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增。
产品特点:
  • 简便:与常规热启动Taq酶反应条件一致,无需改变扩增程序。
  • 高效:有效减少了杂带及拖带产生,从而实现高特异性的PCR。
  • 灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段(图例二)。
  • 稳定:经测试,反复冻融40次后,扩增性能仍不受影响。
  • 快捷:PCR反应所必需试剂全集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配制。
产品用途:
  • 高特异性PCR反应;
  • 复杂模板扩增;
  • Multiplex PCR;
  • 基因组扩增检测。
使用建议:
使用本制品扩增得到的PCR产物具有3´端"A"突出,因此可直接克隆于T载体中。
应用实例:
2x HotStart Taq Master Mix Amplification
图例一)50μl扩增体系中,以50ng人基因组DNA为模板,2×Hot Start Taq可对特定基因片段(170bp)进行高特异性扩增。
泳道M:DNA 2000 Ladder; 泳道1,2:普通Taq酶 1.25U; 泳道3,4: HotStart Taq酶,1.25U
Taq DNA Polymerase Amplification
图例二) 50μ l 扩增体系中,分别以50ng~0.05ng人基因组DNA为模板, 可对特定基因片段(380bp)进行很好 的扩增。
泳道1:50ng; 泳道2:5ng; 泳道3:0.5ng; 泳道4:0.05ng;泳道M:DNA 2000 Ladder

产品包装(A包装):

组成 体积
2×HotStart Taq Master Mix 1ml×1支

常用反应体系(50μl)

组分 体积
2×Master Mix* 25μl
上游引物 0.2-1.0μM(终浓度)
下游引物 0.2-1.0μM(终浓度)
模板 1-50ng(质粒)
10ng-1μg(基因组)
ddH2O 至50μl
*Mg2+终浓度为2mM

常用PCR循环:

当扩增片段<3K:
94℃ 10分钟
30次循环 94℃,30秒
57℃,30秒
72℃根据产物长度调整, 60秒/kb
72℃ 5分钟
4℃ 保温
当扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp):
94℃ 10分钟
30次循环 94℃,5秒
68℃根据产物长度调整, 60秒/kb
72℃ 5分钟
4℃ 保温
For research use ONLY.