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Multiplex PCR Kit (E023)

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产品描述:

本制品针对多重PCR的高产需求及DNA聚合酶的强聚合能力而优化,可在同一个PCR反应体系中,对多个基因使用多对引物同时进行特异性扩增(最多可加入10对引物)。当引物对较多时,可适当添加HotStart Taq DNA 聚合酶和dNTPs以达到良好的扩增效果。

产品用途:
  • 常规PCR鉴定;
  • 高产量PCR;
  • 高通量PCR;
  • 多重PCR;
使用建议:
  • 使用本制品时务必将Buffer反复混匀后再加,避免因组分不一导致结果差异;
  • 配置和分装反应液时请一定使用新的(无污染的)枪头以避免污染;
  • 如扩增条带多,可适当添加酶和dNTPs;
  • 当多重 PCR扩增产物的长度均在1 kb以内时,使用 3%~4%浓度的 Agarose gel进行电泳分离效果最佳;
多重PCR引物设计注意事项:
  • 尽量减小各引物间的 Tm 值差;
  • 目的片段长度尽量在 1 kb以下;
  • 引物的长度保持在 22~30 bp,GC含量在50~60%为宜,并避免局部区域GC或AT的含量过高;
  • 引物应用于多重PCR前要预先对各目的基因进行扩增,以确认引物的特异性及反应性能;
应用实例:
Multiplex PCR Kit
图例一)50μl扩增体系中,以50ngλDNA为模板,对长度范围在100-800bp之间的片段的扩增结果。
泳道M:DL2000 DNA Marker;泳道1,泳道2:使用7对不同引物同时扩增的结果
保存温度:
-20 ℃
产品包装(A包装):
产品组成体积
5×Multiplex PCR Buffer(5U/μl)1ml
HotStart Taq DNA聚合酶(5U/μl)100μl
dNTPs(10mM)250μl
常用反应体系(50μl):
5×Multiplex PCR Buffer10μl
上游引物*n0.2-1.0μM(终浓度)
下游引物*n0.2-1.0μM(终浓度)
模板50ng
dNTPs1.5μl
HotStart Taq DNA聚合酶1μl
ddH2O至50μl
常用PCR循环:
当扩增片段<3K:
94 ℃ 5min
30次循环94℃,20s
57℃,20秒
72℃,根据产物长度调整,1 kb/min
72℃5min
4℃保温
常见问题及解答:
  • 没有扩增产物或量少:保证每一管的引物,buffer,酶等已全部加入;使用高质量的引物,并检测引物是否降解;确认模板的质量及浓度;适度提高缺失(或低产)条带对应的引物用量;确保预混体系已混匀彻底;
  • 存在非特异性扩增:检查单对引物的扩增性能与特异性;检查酶用量是否过多,酌情减少酶的用量;降低模板使用量;
  • 电泳时条带模糊:检查引物是否出现质量问题,比如降解;减少起始模板量;降低电泳电压,更换新的电泳缓冲液;
For research use ONLY.