PCR产物免回收测序纯化试剂盒 (E066)

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产品描述:

对PCR产物的测序通常需要对PCR产物进行胶回收、柱纯化等处理,不仅成本高,操作复杂,而且还必然损失一定量的产物。在PCR产物不易获得的情况下,采用以上方法往往会使实验的费用和时间成倍增加。如果能对PCR产物直接测序将解除这些烦恼。

Novoprotein提供的免回收PCR产物测序纯化试剂盒利用核酸外切酶I和热敏碱性磷酸酶,仅需简单的保温步骤,方便地去除多余的引物和dNTPs,净化的PCR产物可直接用于测序反应,且不会损失任何产物。此法可以避免繁琐的胶回收、柱纯化、沉淀、磁珠、过滤、透析等方法,大大节省实验费用及时间。

产品原理:

PCR反应结束后,由于产物里一般还残留着引物及dNTPs,这些残留物会阻碍测序反应的进行,如果去除它们,就可以实现对PCR产物的直接测序。热敏碱性磷酸酶可以分解残余的dNTPs,而核酸外切酶I可高特异性地分解单链DNA,而对双链DNA无作用。用这两种酶对PCR产物进行“净化”后,可彻底降解残留引物及dNTPs,随后的80℃保温过程 完全灭活核酸外切酶I和热敏碱性磷酸酶,使净化后的产物可直接用于测序反应。

产品用途:
适用于大规模PCR产物净化测序,大幅提高实验效率,节省实验费用及时间。
实验步骤:
  • 取出7.5 μl PCR反应混合物;
  • 在反应混合物中加入0.5 μl (10 units)的核酸外切酶 I (20,000 units/ml), 37℃反应15分钟;
  • 再加入1μl的10×AP Buffer 和1μl (5 units) 热敏磷酸酶,37℃反应15分钟;如果反应时间延长,可减少酶用量,需试验验证。热失活核酸外切酶 I和热敏磷酸酶:80℃保温20分钟,终止反应。反应物可直接用于测序。
产品包装:
组成 体积
核酸外切酶I(20U/μl) 50μl
热敏磷酸酶(5U/μl) 100μl
10×AP Buffer 1ml
质量保证:
经测试,经本试剂盒净化的PCR产物可直接用于测序反应。
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