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NovoScript®SYBR One-Step qRT-PCR SuperMix (E092)

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产品描述:

本制品是采用SYBR Green嵌合荧光法进行qRT-PCR 的专用试剂。制品中已经将反转录酶、DNA聚合酶、反应用Buffer、dNTPs、SYBR Green等试剂预混在一起,是一种2×浓度的预混型试剂,反应液的配制十分方便简单。
本制品采用HotStart Taq并结合特别配置的缓冲体系,能有效抑制非特异性反应,从而在更广的范围内进行准确定量。
该试剂盒能以动物、植物和微生物的总RNA或mRNA为模板,cDNA的合成与PCR反应在一个管中进行,反转录结束后可直接进入PCR循环而不需额外步骤。本制品配有不同浓度的ROX Reference Dye,用于不同仪器校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。

产品特点:
  • 高特异性:采用特殊工艺制造的热启动HotStart Taq DNA聚合酶,大大提高了PCR扩增的特异性。
  • 高效:Novoprotein精心配制的RealTime PCR专用2×SuperMix,具有更高扩增效率和灵敏度。
使用建议:

原则上-20℃避光保存。如果持续使用,可在4℃内进行短期保存,但此时须遮光,建议使用遮光箱或用添附的铝袋进行保存。

请将体系上下颠倒混匀,动作轻柔,避免起泡,并经轻微离心后使用。反应液的配制、分装请使用新的(无污染的)枪头及Microtube等,尽量避免污染。

一般为了增加敏感度及扩增效率且抑制非特异性反应,扩增的目标序列越短越好,建议设计在200bp以下。另外,GC cluster(特别是3´末端)等会引起引物二聚体等非特异反应,一般不建议采用,特别是Intercalater Assay受非特异性反应影响较大,更需注意。

  • 用ROX Reference Dye I校准的Real Time PCR仪有:

    Applied Biosystems 5700/7000/7300/7700/7900/7900 HT/7900 HT Fast;Applied Biosystems StepOne/StepOne Plus;其他仪器。

  • 用ROX Reference Dye II校准的Real Time PCR仪有:

    Applied Biosystems 7500/7500 Fast;Stratagene MX4000/MX3500P/MX3000P;其他仪器。

  • 不需要用ROX Reference Dye校准的Real Time PCR仪有:

    Bio-Rad CFX96/CFX 384/iCycler iQ5/ iQ /My iQ5/MiniOpticon/Opticon/Opticon /Chromo4;Eppendorf MasterCycler realplex/ realplex 2s。Cepheid SmartCycler;Illumina Eco qPCR;Roche Applied Science LightCycler 480;Thermo Scientific PikoReal Cycler;Qiagen/Corbett Rotor-Gene Q/Rotor-Gene 3000/ Rotor-Gene 6000;其他仪器。

产品包装(A包装):
产品组成体积
2×NovoScript® SYBR One-Step qRT-PCR SuperMix1ml支
NovoScript® RT Enzyme Mix100μl
RNase Free Water1ml×2支
ROX Reference Dye I200μl
ROX Reference Dye II200μl
保存温度:

-20 ℃

常用反应体系(20μl):
2×NovoScript®SYBR One-Step qRT-PCR SuperMix 10μl
NovoScript®RT Enzyme Mix1μl
上游引物0.2-1.0μM(终浓度)
下游引物0.2-1.0μM(终浓度)
模板1-2μl
RNase Free Water至20μl
常用PCR循环:
两步法扩增程序(推荐):
42℃30min
94℃5min
35-40次循环 95℃,15s
60℃,1min
三步法PCR扩增程序(引物Tm值较低或其他原因):
42℃30min
94℃ 5min
35-40次循环 95℃,15s
57℃,20s
72℃,30s
For research use ONLY.