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UDG酶 (E060)

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产品描述:
UDG(UNG)酶分子量25KDa,能特异性识别DNA单链或双链中的尿嘧啶残基,并从DNA上水解去除尿嘧啶残基,防止DNA发生突变,是碱基切除 修复过程中的重要组分,对RNA无活性。
产品用途:
UDG酶常被用于消除PCR扩增中的残余污染。在PCR反应液配制时,将dUTP和dTTP 按一定的比例混用,使得扩增产物都含有脱氧尿嘧啶。在进行PCR扩增前,在PCR混合液添加UDG酶,并增加2分钟37℃~50℃的保温步骤即可消除以往PCR产物的残留污染,由于UDG在PCR循环中的94℃dU的PCR产物。
使用建议:
UDG酶在Taq酶反应缓冲液中同样具有活性。在PCR反应液中直接添加UDG酶即可,推荐用量为0.2U每50μl体系,在PCR循环程序前增加2分钟37oC ~50oC保温及可完全消除多达1ng含UTP模板的污染。
应用示例:
UDG酶特异性降解含UTP的DNA模板.
反应体系:
2×Taq Master Mix 25μl
500bp模板(含UTP) 1ng
500bp扩增引物对 终浓度0.2μM
250bp模板(无UTP掺入) 1ng
250bp扩增引物对2 终浓度0.2μM
dH2O 至50μl
对照组未添加UDG酶,实验组每50μl反应体系中添加0.2U UDG酶。

 

PCR循环程序:
50℃ 2分钟(降解含UTP的 污染模板)
94℃ 4分钟(灭活UDG酶)
30次循环 94℃,30秒
57℃ 30秒
72℃ 30秒
72℃ 5分钟
4℃ 保温
UDG/UNG酶用于防止气凝胶污染
图例1) 结果显示:UDG酶能特异性降解含UTP的DNA模板并阻止其 PCR扩增,且不影响正常模板的PCR 扩增反应。
泳道M:DL2000 泳道1,2:对照组,未添加UDG酶
泳道3,4:实验组,0.2U UDG酶处理
产品包装(A包装):
组成 体积
10×UDG Buffer 1ml
UDG酶(0.5U/μl) 400μl
活性定义:
60分钟内催化1nmol尿嘧啶从含尿嘧啶双链DNA上释放所需要的酶量定义为一个单位。
质量保证:
经多次柱纯化,SDS-PAGE检测纯度大于95%;PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。
常用PCR残余污染消除体系
5×Taq Buffer with Mg2+ 10μl
上游引物 0.2-1.0μM (终浓度)
下游引物 0.2-1.0μM (终浓度)
dATP, dGTP, dCTP 各0.2mM(终浓度)
dTTP 0.1mM(终浓度)
dUTP 0.2mM(终浓度)
如全部使用dUTP替代dTTP 0.4mM(终浓度)
模板 1-50ng(质粒)
10ng-1μg(基因组)
Taq 0.25μl(1.25U )
ddH2O 至50μl
UDG酶 0.2U, 如残余污染严重可适量增加酶用量
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