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NovoScript® All-in-one 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (E043)

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产品描述:

第一链cDNA合成试剂盒是以mRNA或者总RNA为模板,高效合成第一链cDNA。本产品含有反转录反应所需的全部试剂(NovoScript® Reverse Transcriptase,RNase Inhibitor,Oligo(dT)18,Random N6,dNTPs),浓度为2×。反应时只需要加入RNA模板和水即可,操作简单,降低操作过程中的污染。合成的第一链cDNA能直接用做PCR或荧光定量PCR的模板,以及第二链cDNA合成或线性RNA扩增的模板,也可用于放射性或非放射性核苷酸标记第一链cDNA的实验。

操作方法:
  • 第一链cDNA合成
  • 融化后,将试剂盒中各组分混匀并稍微离心后置于冰上。

    • 按顺序加入下面的反应物
      模板RNA总RNA(0.1 ng -5μg)
      poly(A) mRNA(10 pg)
      特异性RNA(0.01 pg)
      2×NovoScript® All-in-one Supermix 10μl
      RNase Free Water至20μl
    • 可选优化步骤。如果RNA模板GC含量高或者含有二级结构,可先将RNA模板和RNase Free Water混匀后,65°C 孵育5分钟,冰上冷却后再加入其它组分。
    • 轻柔混匀后离心,于42°C条件下孵育60分钟。 如果RNA模板中不含poly A结构,可先在25°C条件下孵育5分钟,随后转到42°C条件下孵育60分钟。
    • 70°C加热5min终止反应。

    • 反应产物可直接用于PCR反应,如果不立即使用,在-20°C可保存一周左右。如想延长保存时间,建议使用-70°C 保存。

  • 第一链cDNA的PCR扩增

  • 合成的第一链cDNA可直接用于PCR或qPCR。第一链cDNA反应液体积不能超过PCR反应体系的1/10。通常50 μl的PCR反应体系中,第一链cDNA反应液加入2μl。

注意事项:
  • 用DEPC处理实验用到的所有器材,或者购买已经证明无核酸酶的实验用具,整个实验过程需戴手套并经常更换手套,避免RNA酶的污染。
  • 确保所用试剂中无RNA酶污染。
  • 试剂盒如不使用,要严格密封保存。在反转录过程中,所有管盖要确保扣严。
  • 纯化过的RNA要保证不含有盐,金属离子,乙醇和苯酚,因为以上成分会干扰第一链cDNA的合成反应。可采用乙醇沉淀法去除痕量污染物。
产品包装(A包装):
产品组成体积
2×NovoScript® All-in-one 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix500μl
RNase Free Water1ml
保存温度:
-20 ℃
For research use ONLY.