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NovoScript® Two-Step RT-PCR SuperMix (E046)

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产品描述:

NovoScript® Two-Step RT-PCR SuperMix两步法RT-PCR试剂盒的设计基于本公司生产的NovoScript Reverse Transcriptase反转录酶(novoprotein货号:E123)和HotStart Taq DNA聚合酶(novoprotein货号:E017),具有高效的合成能力和高扩增效率。该试剂盒能以动物、植物和微生物的总RNA或mRNA为模板,用2×NovoScript® All-in-one 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix进行反转录,2×HotStart Taq Master Mix进行扩增。本试剂盒含有从RNA反转录至cDNA并以cDNA为模板进行扩增的全部试剂。

产品特点:
  • 反转录反应操作简单,通过减少实验步骤降低了污染几率。
  • 使用HotStart Taq酶进行扩增,减少非特异性反应。
操作方法:
  • 第一链cDNA合成
  • 融化后,将试剂盒中各组分混匀并稍微离心后置于冰上。
    • 按顺序加入下面的反应物
      模板RNA总RNA(0.1 ng -5μg)
      poly(A) mRNA(10 pg)
      特异性RNA(0.01 pg)
      2×NovoScript® All-in-one 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix 10μl
      RNase Free Water至20μl
    • 可选优化步骤。如果RNA模板GC含量高或者含有二级结构,可先将RNA模板和RNase Free Water混匀后,65°C 孵育5分钟,冰上冷却后再加入其它组分。
    • 轻柔混匀后离心,于42°C条件下孵育60分钟。 如果RNA模板中不含poly A结构,可先在25°C条件下孵育5分钟,随后转到42°C条件下孵育60分钟。
    • 70°C加热5min终止反应。

      反应产物可直接用于PCR反应,如果不立即使用,在-20°C可保存一周左右。如想延长保存时间,建议使用-70°C 保存。


  • 第一链cDNA的PCR扩增:

    合成的第一链cDNA可直接用于PCR或qPCR。第一链cDNA反应液体积不能超过PCR反应体系的1/10。通常50 μl的PCR反应体系中,第一链cDNA反应液加入2μl。

常用反应体系(20μl):
2×HotStart Taq Master Mix 10μl
上游引物0.2-1.0μM(终浓度)
下游引物0.2-1.0μM(终浓度)
模板1μl
Taq
ddH2O至20μl
常用PCR循环:
当扩增片段<3K:
94℃ 5min
30次循环94℃,20s/57℃
20s/72℃
根据产物长度调整,1kb/min
72℃5min
4℃保温
当扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp):
94℃20s
30次循环 94℃,5s/68℃
根据产物长度调整,1kb/min
72℃5min
4℃保温
产品包装(A包装):
产品组成体积
2×NovoScript® All-in-one 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix 500ul
2×HotStart Taq Master Mix1ml×2支
RNase Free Water 1ml
保存温度:
-20 ℃
For research use ONLY.