pNovoGST-Tev (V103)

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产品描述:

本质粒以XhoI线性化方式提供,请配合NovoRec® PCR产物一步无缝克隆试剂盒使用(CatNo. NR001)。

GST是实验室中最常用的融合标签之一,能够促进目标蛋白质的溶解性和正确折叠。Thormbin作为常用的切除GST标签的蛋白酶,常常出现在目标蛋白中,从而限制了其应用。pNovoGST-Tev质粒在 Thombin位点后引入了TEV Protease切点,极大的增加了标签切除的特异性。

目的基因扩增按常规方法设计引物后,在5´端引物前添加以下序列:CTC TAC TTC CAA GGT; 3´端引物前添加:GTC ACG ATG CGG CCG。3´端引物需要加入终止密码子。

应用实例
pNovoGST-TEV蛋白质表达
图例一):pNovoGST-TEV载体表达的Human CBS Recombinant Protein纯化电泳图:
Lane 1: Load sample
Lane 2: Flowthrough
Lane 3: Elution by 10mM GSH
Lane 4: Elution by 10mM GSH
Lane 5: Elution-6M Gua-HCl
Lane 6: 蛋白Marker
pNovoGST-TEV Plasmid Map
图例二):pNovoGST-TEV载体表达的Human CBS Recombinant Protein初步纯化后,30℃下,经不同量的TEV Protease酶切2小时:
Lane 1: No rTEV
Lane 2: 100 units/mg
Lane 3: 400 units/mg
Lane 4: 800 units/mg
Lane 5: Molecular weight marker
pNovoGst-Tev Map
Tac promoter184 -212
GST Tag258 -932
TEV site933 -956
Amp resistance1380-2240
pBR322 Ori2395-3014
lacI CDS3444-4403
lacZ alpha4526 - 4969
Taq DNA Polymerase Amplification
产品组成:
组分体积
pNovoGST-TEV1ug
NovoRec®重组酶20μl
10×NovoRec®重组缓冲液50μl
Control Insert(50 ng/μl)10μl
TEV protease100U

附赠:
2×pfu Master Mix (快速上样型)1ml
2×Fast Taq Master Mix(快速上样型)1ml
DNA Ladder 2000 Plus100μl
质量控制:
pNovoGST-TEV线性化载体经过严格的自连测试以及连接效率测试。
载体序列见www.sinobio.net.
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For research use ONLY.