pNovoSec (V106)

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产品描述:

pNovoSec专为目标蛋白在大肠杆菌中高效分泌表达设计,是预先用XhoI线性化的载体,可配合NovoRec® PCR产物一步无缝克隆试剂盒(CatNo. NR001)使用。

外源蛋白在大肠杆菌中表达容易形成包涵体,使获得有生物学活性的蛋白增加困难。同时大肠杆菌细胞内为还原环境,目标蛋白二硫键无法形成。周质分泌是获得正确折叠的目标蛋白质的有效途径,常见表达载体往往由于蛋白表达过快,目标蛋白来不及正确折叠和分泌 而形成包涵体。该质粒适用于阿拉伯糖诱导,有较强的剂量依赖性。合适的阿拉伯糖浓度能够在保障表达效率的同时获得有效的蛋白质分泌。

目的基因扩增按常规方法设计引物后,在5´端引物前添加以下序列:CCG GCG ATG GCC ATG; 3´端引物前添加:CGC GGC CGC AAG CTT。注意:5´端引物从第一个氨基酸不是甲硫氨酸(ATG)时,可使用 CAG CCG GCG ATG GCC。不希望目标蛋白C端保留His Tag时,3´端引物 需要加入终止密码子。

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图例一)pNovoSec目标蛋白分泌表达与纯化。
阿拉伯糖在合适的诱导条件下目标蛋白基本以可溶形式分泌,纯化结果表 明每升培养物可获得300毫克目标蛋白。
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pBAD promoter3-277
pelB leader319-435
rrnB Terminator456-881
Amp resistance974-1834
pBR322 ori1979-2652
AraC CDS3183-4085
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产品组成:
组分体积
pNovoSec1ug
NovoRec®重组酶20μl
10×NovoRec®重组缓冲液50μl
Control Insert(50 ng/μl)10μl

附赠:
2×pfu Master Mix (快速上样型)1ml
2×Fast Taq Master Mix(快速上样型)1ml
DNA Ladder 2000 Plus100μl
质量控制:
pNovoSuno线性化载体经过严格的自连测试以及连接效率测试。
载体序列见www.sinobio.net.
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For research use ONLY.