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pNovoSumo (V105)

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产品描述:

pNovoSumo专为目标蛋白在大肠杆菌中可溶性表达设计,是预先用Xho I线性化的载体,可配合NovoRec® PCR产物一步无缝克隆试剂盒(CatNo. NR001)使用。

外源蛋白在大肠杆菌中表达容易形成包涵体,使获得有生物学活性的蛋白增加困难。常见表达载体往往由于蛋白表达过快,目标蛋白来不及正确折叠而形成包涵体。该质粒使用于阿拉伯糖诱导,有较强 的剂量依赖性。合适的阿拉伯糖浓度能够在保障表达效率的同时获得高效的可溶蛋白。SUMO融合标签可有效促进目标蛋白的正确折叠,从而提高蛋白质的可溶性,同时SUMO Protease(CatNo. PE002)是一种 结构特异性的蛋白酶,只切割有正确构象的融合蛋白,因而准确移除 融合标签。

目的基因扩增按常规方法设计引物后,在5´端引物前添加以下序 列:GAA CAG ATT GGA GGT ATG; 3´端引物前添加:CGC GGC CGC AAG CTT。注意:5´端引物从第一个氨基酸不是甲硫氨酸(ATG)时,可使用 GAA CAG ATT GGA GGT。不希望目标蛋白C端保留His Tag时,3´端引物 需要加入终止密码子。

pNovoSUMO蛋白质表达
图例一)pNovoSumo融合蛋白表达。诱导前后显示明显的目标蛋白质表达。
pNovoSUMO 质粒图谱
pBAD promoter3-277
SUMO fusion tag319-642
rrnB Terminator711-1136
Amp resistance1229 - 2
pBR322 ori2234 -29
AraC CDS3438-4340
pNovoSUMO 多克隆位点
产品组成:
组分体积
pNovoSumo1ug
NovoRec®重组酶20μl
10×NovoRec®重组缓冲液50μl
Control Insert(50 ng/μl)10μl
Sumo Protease100U

附赠:
2×pfu Master Mix (快速上样型)1ml
2×Fast Taq Master Mix(快速上样型)1ml
DNA Ladder 2000 Plus100μl
质量控制:
pNovoSuno线性化载体经过严格的自连测试以及连 接效率测试。
载体序列见www.sinobio.net.
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