抗体制备: 重组蛋白抗原

抗体制备:重组蛋白抗原

目前抗体制备常采用多肽抗原及重组蛋白质抗原,这两种方法各有优缺点,需结合实验需求进行选择。


重组蛋白质抗原上往往带有多个不同的抗原决定簇,其中有些是顺序决定簇,有些为结构决定簇。利用变性的抗原免疫动物获得多克隆抗体是针对各个抗原决定簇的抗体的混合物,在一般应用中能够用于检测天然结构或变性的目标蛋白。利用变性蛋白做为免疫原的一个附带的好处是变性蛋白往往有更强的免疫原性,能够刺激动物产生强的免疫应答。


用做抗原目的的蛋白质一般选择使用大肠杆菌表达体系,因为该体系时间与金钱成本最低。为了提高目标蛋白质表达的可能性与纯化的方便性,人们有时只表达目标蛋白的一个小的片段如特定的结构域。大肠杆菌系统是欣百诺最早建立的成熟表达体系,有一系列设计完美的表达载体与非常成熟的表达培养条件,能够在较短时间内获得基因表达产物,且所需的成本相对较低。


如果制备抗体的目的单纯用于wb检测,采用合成的小肽作为抗原是经济快速的,但是存在由于肽段选择不合适造成的免疫原性弱或者无反应原性的风险,由于抗体制备需要较长的周期,因此利用多肽抗原制备抗体时,常常选取两三段不同的肽段以保证实验的成功率。


一般用多肽制备的抗体只能识别顺序决定簇,用于检测非变性状态的抗原时效果很差,特别是制备中和抗体时,需要最大可能的保持抗原的天然结构。重组抗原在免疫原性、表位多样性上远优于多肽

·抗体制备(重组蛋白抗原)—— 步骤 1. 重组蛋白抗原表达及纯化制备
免疫用的多肽抗原 纯度要求大于80%,更高的纯度虽然理论上可以获得特异性更好的抗体,实际操作过程中动物总是要产生大量非特异性抗体,从而掩盖了抗原纯度所带来的收益。
抗原序列的决定:
客户提供目标蛋白序列或cDNA序列,我们将进行抗原性分析预测,并结合您的实际需要,选取最佳的区域作为抗原序列。
此步骤服务说明请查考 重组蛋白表达与纯化技术服务(E. coli表达系统)。

·抗体制备(重组蛋白抗原)—— 步骤 2. 免疫动物/采血
目前我们仅提供兔子的多抗制备,采用的动物为SPF级新西兰大白兔。每两周免疫一次,共免疫5次。
ELISA检测,确保免疫后血清效价大于1:4000。
客户需要提供的材料:
若客户提供交联好的蛋白,请与客服人员沟通其具体要求。
提供客户:60-100ml免疫后血清,1ml免疫前血清对照,效价检测结果
时间:10周左右


后继抗体纯化步骤,请参照抗血清Protein A/G亲和抗原特异性亲和纯化服务说明。


·抗体制备订购信息:
邮箱:info@sinobio.net
电话:021-50798028
传真:021-50798028-13

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