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基因克隆、载体构建

欣百诺在分子生物学实验及重组蛋白制备方面都有着丰富的经验,以重组蛋白制备为核心,为客户提供可靠的分子生物学技术服务,主要包括:基因合成、基因克隆、载体构建、定点突变(单点及多点突变)、DNA操作(片段缺失及拼接等)及质粒大量制备。

·基因克隆、载体构建——步骤 1. 表达系统选择及方案设计(此项服务免费)
根据客户所需的要求,推荐最适合的表达系统(大肠杆菌/酵母/昆虫细胞/哺乳动物细胞表达系统)。
根据客户选择的表达系统,推荐密码子优化方案。
设计最佳的表达载体构建(是否融合表达、是否添加Tag等)及相应的蛋白纯化方案
提供客户:各种建议方案
时间:1~3工作日

·基因克隆、载体构建——步骤2. 获取目标基因DNA序列
从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。
根据选定的表达系统对cDNA进行密码子优化。
合成设计好的基因序列或通过基因克隆的方式获得基因序列。
提供客户:目标基因(在T载体或常规克隆载体上)及测序报告
时间: 2~3周

·基因克隆、载体构建——步骤3. 表达载体构建
选定的标签序列/Tag (可选用的Tag见下表)按同一读码框融合于标基因的5’,3’端(亦可融合在基因编码序列中,融合位置需专门设计),也可利用载体上自带的标签序列而无需另外添加。

标签序列/Tag列表

Taq名称

 用途

HIS

亲和纯化

GST

亲和纯化

MBP

亲和纯化

Nus

增加蛋白可溶性

trxA

提高蛋白表达量

Myc

表达检测

FLAG

表达检测

HA

表达检测

GFP等荧光蛋白

表达检测

将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。
测序验证构建质粒的准确性。
可提供的表达载体(若需特殊的表达载体或启动子序列,需由客户提供):


大肠杆菌表达体系载体

Expression Vector

 Promoter

 载体所含Tag

pET3a, pET11a, pET24a

T7/ac

None or T7 Tag

pET32a

T7/ac

TRX & HIS

pET41a

T7/ac

GST & HIS

pET22b, pET25b, pET26b

T7/ac

Secret

pET28a, pET15b, pRSETb

T7/ac

HIS

pET50b, pET43a

T7/ac

Nus, HIS

pPEPTIDE

T7/ac

HIS

pMAL-c2x

T7/ac

MBP

pGEX4T, pGEX5X, pGEX6P

T7/ac

GST

pQE30

T5

HIS

pTrcHisB

Trc

T7, HIS

pTWIN

T7/ac

Intein, CBD

pBV220

PRPL

None

 

 

 


酵母表达体系载体

Expression Vector

 Promoter

 载体所含Tag

pPICZα

AOX1

 

pPIC9K

AOX1

 

PGAPZα

GAP

 

pYES2/CT

GAL1

 

 

 

 


昆虫细胞表达体系载体

Expression Vector

 Promoter

 载体所含Tag

Bacmid DNA

 

 

 

 

 


哺乳动物细胞表达体系载体

Expression Vector

 Promoter

 载体所含Tag

pcDNA3.1

CMV

 

pcDNA4.0

CMV

 

EGFP

CMV

EGFP

提供客户:正确构建的重组表达质粒,含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。

时间:1周

 

·基因克隆、载体构建——步骤4. 质粒大规模柱纯化服务
我们采用国外进口的DNA纯化填料,通过柱纯化方式纯化提取质粒,可为客户提供高纯度质粒,并可根据需求进行去内毒素处理。可对质粒进行大规模柱纯化,提供客户1mg至克级以上的纯化质粒。
提供客户:纯化质粒,对于要求去内毒素的质粒提供鲎试剂检测报告。
时间:1周

·基因克隆、载体构建——订购信息:
邮箱:info@sinobio.net
电话:021-50798028
传真:021-50798028-13 



 

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